一、制备显微标本的切片法

　　这是*常用的切片法。以石蜡作为组织的填充支持介质，将整块组织加以包埋，*后凝固成均匀一致的固态结构。用切片机制取*薄的切片。为了让石蜡能浸入组织内部，需将组织经过脱水等处理。过程大致如下：

　　⑴固定：生物标本脱离机体或培养环境，细胞会发生自溶，腐败分解。因此，需用固定剂处理，使蛋白质凝固停止濒死或死后变化。凡供******保存的标本都需经固定处理。

　　常用的固定剂是甲醛、乙醇等，能使蛋白质凝固。还有由几种试剂配成的固定液，例如Carnoy固定液，由无水酒精、氯仿、冰醋酸配成，固定力更快更强，不含水分，可避免水溶性物质如糖原等在固定过程中损失。

　　⑵脱水：是将组织细胞所含水分除去。通常用乙醇（Alcohol，酒精），浓度递升到100%。此过程还使组织块进一步硬化。

　　⑶透明：是用既能溶于纯酒精又能融解石蜡的有机溶剂，将组织中的酒精取代，以便石蜡浸入。通常用二甲苯（xylene）为透明剂。

　　⑷浸蜡：在温箱内进行。已透明的组织块放入加热融解的石蜡中，让石蜡浸透组织，作为支持介质。

　　⑸包埋：将已浸蜡的组织块放入热融的包埋石蜡中，迅速冷凝，组织决便被蜡包埋。

　　⑹切片：用切片机。常用的切片机有轮转式、平推式的。用轮转式的易于切出连续切片。切片厚度随制片目的而调整。教学标本厚度多是5~6μm。

　　⑺贴片烤干：石蜡切片在温水上展平后，移在玻片上，烤干，即可供染色处理。染色后用树胶、盖坡片封固，可******保存。

　　二冷冻切片法

　　冷冻切片法是借组织在低温下，冻结变硬而达到符合切片要求。冷冻切片法需有冷冻切片机，或在普通切片上配制冷设施。恒冷切片机是高级冷冻切片设备。它有一个恒冷箱，标本致冷台和切片机都装在箱内。恒冷箱的作用类似冰箱，可在一定范围内调整温度，其结构有利于保持箱内恒定低温，减少箱门打开时环境温度的干扰。切片机的轮转把手装在箱外，便于操纵切片。

　　冷冻切片法的优点是：在处理得当时，它可以******限度地保持组织的新鲜状态。并且，由于不需经脱水、透明、浸蜡等过程中有机溶剂的处理，及湿箱浸蜡热的影响，甚至可不经固定。所以能很好地保存组织细胞的各种成分和酶的活性，因此在酶的组织化学研究中常用此切片法。

　　二、显示标本结构成分的染色法

　　一苏木素伊红染色法（HE染色法）

　　为*常用的染色法。该法应用于各种组织的染色，是组织学技术的基本方法，对任何液体固定的组织和各种包埋的切片均可使用，只是对不同包埋的切片法处理略有不同。下面简介石蜡包埋切片的HE染色法。

　　1、脱蜡：石蜡切片的组织内部充满石蜡，不能使水溶性染液着色，因此在染色前必须*先用二甲苯将石蜡脱掉，共两次。

　　2、下行入水：将已脱蜡的标本浸入无水酒精及各级酒精，使组织逐步接近水。3、蒸馏水略洗。

　　4、苏木素溶液染色约5—15分钟

　　5、自来水洗去多余染料。

　　6、入稀释的盐酸酒精溶液中分色，边分色边镜检，至核呈红紫色，细胞质无

　　色为合适。

　　7、分色后用自来水或加数滴氨水碱化，直至细胞核变成蓝色。这一步骤也可称为“蓝化”。

　　8、入蒸馏水洗去碱性水分。

　　9、入70%酒精→80%酒精各5分钟。

　　10、入伊红染液染色30秒至数分钟。

　　11、以95%酒精对伊红分色，至胞浆，结缔组织等呈桃红色。

　　12、上行脱水：染色后的切片，因组织内含水而不透明，不能清晰地观察其微细结构。因此，须将组织内的水分经各级酒精→无水酒精逐步置换，*后进入不含水份的透明剂内。

　　13、透明：入二甲苯透明剂，二次（各数分钟）。

　　结果：细胞核蓝紫色，胞浆、胶原纤维、肌纤维为桃红色，嗜酸性颗粒为鲜红色，弹性纤维呈明亮桃红色。